Về cơ bản, bút thử thai có nguyên lý hoạt động tương tự như que thử thai. Bút hoạt động dựa theo việc kiểm tra nồng độ HCG có trong nước tiểu nữ giới khi mang thai. Theo đó, khi trứng đã được thụ tinh thì nồng độ HCG có trong nước tiểu nữ giới sẽ tăng lên và dùng bút thử thai kiểm tra thì bút sẽ báo 2 vạch với trường hợp mang thai, 1 vạch nếu không mang thai.
